Ctab Là Gì
-
Các chúng ta ơi, bản thân đang làm cho đồ án xuất sắc nghiệp , đề tài là mày mò tính đa dạng di truyền của cây điều, phương pháp dựa trên phương pháp RADP (AFLP (and RFLP) of cashew) , nhưng lại mà mình chạm chán 1 vướng mắc gỡ mãi ko ra. Số là mình ko làm sao để trích lý DNA mang lại đạt chuẩn được. Theo triết lý thì kết quả trích lý bằng lá non là hiệu quả tốt nhất, nhưng lại ở lá điều non thì bản thân lại ko trích lý được DNA mà không tìm ra được nguyên nhân. Mình có thế trích lý được trên lá cứng cáp nhưng bị mear lắm, giống hệt như đuôi sao chổi. Thường thì , DNA đạt chât lượng khi chụp máy với nhuộm tia UV đề nghị ra 1 band thật sáng (và duy nhất band kia thôi). Nhưng của bản thân mình đều ra 1 vết dài hoặc 1 band có một vệt dài bên dưới, fan ta điện thoại tư vấn đó là gãy DNA. Bản thân ko biết ngoài nguyên nhân đó còn có nguyên nhân nào không giống không. Bạn muốn tìm ra vì sao và biện pháp khắc phục. Không nhiều nhât làm cho ko ra thì phải kiếm được nguyên nhân thua trận mới báo cáo được. Bản thân còn thời hạn ít lắm...huhuhu...Ai góp mình với. Còn một chi tiết nữa, lá điều mình nên về Nha Trang đem , trữ vài ba ngày rồi new đưa vào chống thí nghiệm. Ko biết gồm phải đây là nguyên nhân ko nữa.
Bạn đang xem: Ctab là gì
Bây giờ bản thân rất cần tài liệu về1. Thành phần hóa học của lá cây me, cây cacao.2. Phương pháp trích lý DNA của cây điều (nhất là các bước (protocol)).Có bạn nào có thì góp mình cùng với nhen....huhuhuhu.....
Chào chúng ta Gianghanviet,Mình chưa tách bóc DNA từ thực vật đề nghị ko thể chỉ bạn protocol nhưng có vài ý nỗ lực này:1- dòng smear nhiều năm dài đó có thể là RNA các bạn đã cách xử lý với RNAase chưa? nếu chưa thì giải pháp xử lý với RNAase xem nó gồm hết không.2- lúc lấy chủng loại ở xa chúng ta có thể đem theo 1 bình nitơ lỏng nhỏ dại để bảo vệ mẫu trước khi đem lại phòng thí nghiệm, nơi bao gồm điều kiện bảo vệ lạnh sâu.
Tôi tách DNA từ thực vật tương đối nhiều rồi. Trước hết bạn tách bóc bằng pp CTAB hay cần sử dụng Protease K? Nêu vắn tắt protocol và upload cái hình ảnh điện di lên được ko?
N
Nguyễn Đặng Thu CúcMember
gianghanviet said:
Các bạn ơi, mình đang làm cho đồ án giỏi nghiệp , chủ đề là khám phá tính đa dạng di truyền của cây điều, cơ chế dựa trên cách thức RADP (AFLP (and RFLP) of cashew) , nhưng mà mình chạm chán 1 vướng mắc gỡ mãi ko ra. Số là mình ko làm sao để trích lý DNA mang lại đạt chuẩn được. Theo kim chỉ nan thì tác dụng trích lý bởi lá non là hiệu quả tốt nhất, tuy vậy ở lá điều non thì bản thân lại ko trích lý được DNA mà không tìm ra được nguyên nhân. Mình tất cả thế trích lý được trên lá cứng cáp nhưng bị mear lắm, giống hệt như đuôi sao chổi. Thông thường , DNA đạt chât lượng lúc chụp máy và nhuộm tia UV cần ra 1 band thật sáng (và chỉ một band đó thôi). Nhưng của mình đều ra 1 vết lâu năm hoặc 1 band tất cả một vệt dài bên dưới, bạn ta call đó là gãy DNA. Mình ko biết ngoài tại sao đó còn có nguyên nhân nào không giống không. Bạn muốn tìm ra tại sao và bí quyết khắc phục. Không nhiều nhât làm ko ra thì phải tìm được nguyên nhân đại bại mới report được. Mình còn thời gian ít lắm...huhuhu...Ai giúp mình với. Còn một cụ thể nữa, lá điều mình đề xuất về Nha Trang lấy , trữ vài ba ngày rồi bắt đầu đưa vào chống thí nghiệm. Ko biết có phải đấy là nguyên nhân ko nữa.Bây giờ bản thân rất yêu cầu tài liệu về1. Thành phần hóa học của lá cây me, cây cacao.2. Cách thức trích lý DNA của cây điều (nhất là các bước (protocol)).Có chúng ta nào gồm thì giúp mình cùng với nhen....huhuhuhu.....
Xem thêm: Written Off Là Gì - Write Off / Xóa Sổ, Loại Bỏ
Thời gian vừa rồi em bao gồm làm bóc DNA tự lá cây thực đồ (Arabidopsis Thaliana), em cũng có DNA isolation protocol (với CTAB). Trường hợp chị phải em hoàn toàn có thể post lên đây để chị tham khảo. Em cũng gặp trường hợp tương tự như là DNA chiếm được không xuất sắc lắm. Em nghĩ nguyên nhân chính là do quá trình tách, cùng preserve lá cây sau khoản thời gian lấy mẫu. Smear chị nhìn thấy rất hoàn toàn có thể là RNA, hoàn toàn có thể loại bỏ bằng cách dùng RNase. Dẫu vậy em suy nghĩ hai phương thức AFLP cùng RFLP chỉ work on DNA, yêu cầu RNA không interfere nhiều đâu ạ. đề xuất RNase có lẽ không buộc phải thiết.
Protocol và mẫu hiệu quả của lá điềuPROTOCOL- B1: nghiền chủng loại lá tươi bằng cối vào 1.2ml EB buffer(EB: tris-HCl, NaCl, EDTA, CTAB, nước cất)-B2: mang lại vô eppendorf 1.5ml, vortex ky (khoang 5 - 10 phut)-B3:ủ làm việc 65 độ C trong 45 phút-B4: mang đến chloroform/isoamyl (24:1) vào, vortex (10 phut), ly trọng tâm 5 phút14.000vònng 10độ C-B5: hút dịch noi mang lại vô eppendorf mới, lập lại B4-B6: mang lại RNase ủ 37 độ C vào 60 phut-B7: đến isopropanol để -20 độ C trong 30 phút (nhưng thường đến qua đêm vày qui trình quá nhiều năm )-B8: ly trung khu 14.000 vòng vào 5 phut 10 độ C-B9: vì chưng dich tren, rước kết tủa.-B10: mang lại TE 1X u 37doC 30phut để tan kết tủa rồi thấm sodium acetatva ethanol 100% vao ly tâm14.000 vòng 5 phút 10 độ C-B11: rửa bởi ethanol 70% 2 lần bằng cách do dd vao ket tua roi lytam 14.000vong 2phut 10doC.-B12: để khô tự nhiên và thoải mái rồi cho TE 1X u 37doC trong 30 - 60phut.ton tru -20doC END.CÂU HỎI :-đã mang đến RNase đề nghị những vệt smear đó chưa phải là RNA với lại trường hợp làRNA thi smear vẫn nằm hết sức thấp, dưới cả vệt loading dye ở đầu cuối (đã thử ko đến RNase). Vậy liệu ngoài kỹ năng là DNA gãy thì smear đó rất có thể là gì khác không?-Ðã tiến hành các làm việc rất nhẹ nhàng, làm trên cây me cùng ca cao thuộc 1 các bước như vậy tuy nhiên band siêu to, ko gồm hay rất ít smear.-Liệu việc lưu trữ khá lâu chủng loại trong tủ lạnh trước lúc đưa vào tủ -20 độ C và thời hạn tồn trữ khá lâu trong quá trình trích lý (khoảng trên dưới 2 tuần những lần tồn) có tác động ko?-Ngòai cách nghiền mẫu mã lá tươi tất cả cách lý trích nào không giống , để sở hữu thời gian thu thập và lưu tồn mẫu được lâu dài hơn (vì làm về nhiều mẫu mã di truyền) tại chỗ này có có tác dụng thử bằng mẫu lá thô (làm khô bởi silicagel) tuy nhiên trích lý ra khôn xiết smear.-Vì sao lá điều non lý trích ko ra ?
bạn mang lại RNAse phần trăm bao nhiêu % vậy?rất có chức năng smear của người sử dụng là RNA cùng còn dính thêm 1 số protein khác cho nên nó chạy chậm chính vì như vậy vệt smear này nằm thấp.Trong protocol bạn làm có 2 điểm tui chú ý:-B4: đến chloroform/isoamyl (24:1) vào, vortex (10 phut), ly vai trung phong 5 phút 14.000vònng 10độ C -B5: hút dịch noi đến vô eppendorf mới, lập lại B4 -B6: mang đến RNase ủ 37 độ C vào 60 phut trước lúc sang cách 6, khi nào tui cũng lọc lấy tủa DNA bằng Et 80%, thanh lọc rữa kỹ lưỡng, nhằm khô tự nhiên vài tiếng, hoàn thành mới đến TE buffer vào hòa tan DNA kế đến mới mang lại RNAase vô. Vì quy trình bạn thu dịch nổi ở bước 5 có thể dính 1 chút đỉnh Chloroform gây tác động đến RNAase. Trong lúc ủ với RNAase ?phải lắc nhẹ mang đến RNAse hòa tan đều.Tôi sẽ chuyển câu hỏi của bạn cho 1 chuyên gia có tác dụng về thực đồ gia dụng giúp giải đáp.
HI. Bản thân xem quy trình của người sử dụng rùi. Bản thân có một số trong những góp ý sau.- giả dụ chât lượng ADN như trong ảnh bạn post lên thì QUÁ đầy đủ đề có tác dụng RAPD, mình cũng làm rât nhiều về RAPD, ADN như bạn bóc tách được là quá giỏi để các bạn làm RAPD, hãy yên trọng tâm về chât lượng ADN.- nếu như bạn còn muốn tối ưu hơn thì mình có một trong những góp ý sau: ?+ Trong quy trình của bạn, ở cách 4, không nên voltex mang đến 10 phút, mà nên làm lắc mạnh bằng tay 6-7 lân. Đây cũng là trong những nguyên nhân gây gãy ADN. + kiểm tra lại ARNse, chúng ta nên chắc hẳn rằng rằng ARNase đã được vứt bỏ ADNase bằng phương pháp đun ởn 100oC trong 10 phút (có thể dùng máy PCR). + Việc bóc tách ADN tự mâũ lá non thì theo tôi, các bạn phải nghiền dịu tay hơn vày thành tế bào sinh sống mâũ lá non không vững chắc như sinh sống lá già, bởi vì đó rất có thể bạn đã làm cho gãy cơ học tập ADN ở quá trình nghiền mâũ. Bạn cũng có thể nghiền mâũ lá non bởi ống Effendorf 1.5ml, "chày" thì chúng ta dùng đâù tip 1ml hơ nóng rùi ấn nhanh vào ống Eff 1.5ml luân chuyển để chế tạo ra đâù tròn của ống và vừa đẹp với CỐI. Nghiền bởi dụng nỗ lực này sẽ sở hữu được lực ép yếu hơn. + Còn một góp ý nữa. Sau bước 3. Chúng ta nên cho mâũ vào thùng đá và lắc vơi 50-100 vòng/phút trong 1,5h. Bước này sẽ giúp đỡ ADN được phân tách ra xuất sắc hơn.. ? Tui chỉ giup được vâỵ thôi, mong muốn là bạn sẽ thành công.Chú ý là: nếu không tồn tại thời gian nhiều thì ADN cơ mà bạn tách được vân là quá xuất sắc đề có tác dụng RAPD (nhớ buộc phải đo OD, đem đến nồng độ tối ưu 100ng ADN/1ul nhằm RAPD được chạy tốt).BYE
Tôi chấp nhận với skyvn về dòng hình ảnh. Unique DNA bạn bóc như cụ đã được rồi. Bạn chỉ việc đo OD thêm để xác minh tính sạch của thành phầm DNA.Tôi ko nghĩ phần đa vệt mờ đó là do RNAase đâu. Trơn rRNA đã nhiều loại hết rồi thì không có lý vày gì bảo RNAase ko hoạt động.Đối với những mẫu đã tách bóc rồi, bạn muốn đẹp hơn thì chỉ việc "tủa lại bằng EtOH", năng lượng điện di lượng mẫu đậm hơn, chỉnh ống kính, bấm thiết bị remove background.Đối với mẫu chưa tách, bao gồm 2 phương pháp tối ưu1. Nếu sẽ phải tủa qua tối thì chúng ta thử nỗ lực isopropanol bởi EtOH 100% chưa?2. Giảm thời gian ử mẫu ở 65oC xuống 30 min.Đối với chủng loại lá non, tôi cấm đoán rằng DNA bị vỡ khi bị ép cơ học. Ở bên này khi tôi cho thăm phòng thử nghiệm chuyên bóc DNA bởi CTAB. Họ ép mẫu bởi robot thực hiện lực từ để "lắc" viên bi sắt trong khi mẫu đựng vào đầu tip 1 ml. Do đó, khi thu mẫu mã họ thu trực tiếp vào vỏ hộp đầu tip, nhúng tức thì vào nitơ lỏng (đây là bắt buộc, và cũng hoàn toàn có thể là lý do bạn mất mẫu mã khi bóc mô lá non, tế bào non chứa đựng nhiều nuclease), bổ sung đệm vào đầu tip và gửi lên máy. Các bước này cực kỳ công nghiệp . Tôi sẽ nhờ 1 các bạn chuyên trách tiến trình này nhằm hỏi xem chúng ta có chuyển đổi gì vào buffer so với của chúng ta ko?
Mình cực kỳ cảm ơn sự đóng góp nhiệt tình của các bạn, nó góp minh lạc quan hơn rất nhiều, thiệt sự giờ bản thân rối quá!!! ?mình muốn hỏi ko biết tài năng liệu nào kia noi về mẫu smear này không? liệu nó có ảnh hưởng gì tới sự việc chạy RAPD không, bởi RAPD la dùng các cặp mồi tự dưng dể nhân những đọan fragment rồi đối chiếu số đoạn nay để xác định tính đa dạng mẫu mã di truyền. Nhưng nếu DNA bị gãy do đó thì sẽ tạo nên ra phần đông đoạn fragment ngắn, bị cắt ngang vì chưng bị gãy, vậy có tác động đến công dụng phân tích tính đa dạng mẫu mã không? lần chần có sách vở và giấy tờ nào đó nói đến vấn đề này không, bởi vì lên báo cáo mình cần phải có "sách , tất cả chứng" cho những thầy về năng lực vẫn hoàn toàn có thể dung RAPD của mẫu ly trích này là đảm bảo. Các bạn có thể giúp mình với, rất có thể giải đáp dùm mình không?
Theo quan lại điểm của bản thân mình về hình ảnh mà bạn post lên, mình có một số nhận xét như sau:1. Về hàm vị DNA, do vậy là đã đủ để triển khai phản ứng PCR-RAPD, do kỹ thuật này chỉ cần một luợng nhỏ ADN (khoảng vài mang lại vài trục ng là đủ). Dùng các quá cũng không tốt.2. Về chất lượng lượng, bởi vậy chưa thể nói là được tốt không. Vì chưng sao? nếu bạn dùng ngay mẫu mã này nhằm chạy RAPD thì tôi nói là trọn vẹn chưa đựợc. Bởi sao? vì chưng chất lựợng ADN ở các mẫu không như nhau, vệt smear quá đậm. Tuy nhiên bạn vẫn thu được kết quả PCR-RAPD sau khoản thời gian điện di, có thể là còn đẹp nữa. Dẫu vậy bạn đã trở nên mắc vào một trong 5-6 disadvantages của PCR-RAPD đó là cần phải có DNA toàn bô đồng hồ hết về chất lựơng giữa những mẫu, ADN phải tương đối nguyên vẹn thì khi đó ta mới đối chiếu đựợc trên hiệ tượng của phương pháp PCR-RAPD. Điều này quánh biệt lưu ý khi có tác dụng với RAPD. (ngoài tài liệu tôi xem thêm khi thao tác làm việc với RAPD, GS Lê è Bình cũng đã nói với shop chúng tôi về vấn đề này).Xem quy trình của bạn tôi bao gồm một vài ba góp ý:1. Các bạn đã áp dụng CTAB để bóc ADN, detergent này rất thích hợp cho việc loại trừ protein và đặc biệt là polysaccharide (polysacchride se làm cho dịch chiết ADN trở phải bị nhớt). Vì vậy, CTAB vô cùng được ưa cần sử dụng trong việc bóc ADN thực vật và các mẫu có chứa lượng chất polysaccharide cao.Nhưng bạn cần phải sử dụng đúng cách dán thì CTAB bắt đầu phát huy đựợc công dụng của nó. Trong quy trình bạn chuyển ra bạn không nói mật độ của Nacl, cùng nồng độ của CTAB là bao nhiêu. Điều này rất là quan trọng. Các bạn cho tôi biết các bạn đã cần sử dụng nó bao nhiêu khi ấy tôi sẽ lưu ý cho bạn.2. Chúng ta dùng Isopropanol để kết tủa ADN, nhưng các bạn lại tiến hành ở -20oC. Ở điều kiện này những protein và các chất khác cũng trở thành kết tủa thuộc ADN cần trong mẫu của doanh nghiệp se bị lẫn tạp. Fan ta thường thực hiện ở RT để tránh protein kết tủa thuộc (điều này được chú ý khi dùng Isopropanol). Tôi vẫn thử với quả quả thật vậy.3. Bởi mẫu của chúng ta là Thực vật, nhưng tôi ko thấy các bạn dùng chất nào để can thiệp vào những hợp hóa học polyphenol, dung nhan tố,... Hóa học này hoàn toàn có thể chiếm cho tới 30% vào thực vật. Bởi vì sản phẩm thay đổi của polyphenol sẽ liên kết vào ADN tạo ra thành phức và bước vào cùng cùng với ADN khi bạn kết tủa. Hơn nữa, nó gồm thể ảnh hưởng đến enzym polymerase do nó bắt mất ion Mg.Đấy là một trong vài nhắc nhở nho nhỏ dại của tôi, bạn khám phá xem cầm nào nhé.Chúc các bạn thành công.
Xem thêm: Ngứa Tai Báo Điềm Gì ? Tìm Hiểu Điềm Báo Ngứa Tai Để Tránh Ngứa Tai Trái Là Điềm Gì
Gửi bạn thành viên cũ!Bạn ơi cho chính mình hỏi(EB: tris-HCl, NaCl, EDTA, CTAB, nước cất) tỉ lệ ra sao vậy nhỉ?
You must log in or register lớn reply here.
Share:
FacebookTwitterEmailShareLink
Bạn đang xem: Ctab là gì
Bây giờ bản thân rất cần tài liệu về1. Thành phần hóa học của lá cây me, cây cacao.2. Phương pháp trích lý DNA của cây điều (nhất là các bước (protocol)).Có bạn nào có thì góp mình cùng với nhen....huhuhuhu.....
Chào chúng ta Gianghanviet,Mình chưa tách bóc DNA từ thực vật đề nghị ko thể chỉ bạn protocol nhưng có vài ý nỗ lực này:1- dòng smear nhiều năm dài đó có thể là RNA các bạn đã cách xử lý với RNAase chưa? nếu chưa thì giải pháp xử lý với RNAase xem nó gồm hết không.2- lúc lấy chủng loại ở xa chúng ta có thể đem theo 1 bình nitơ lỏng nhỏ dại để bảo vệ mẫu trước khi đem lại phòng thí nghiệm, nơi bao gồm điều kiện bảo vệ lạnh sâu.
Tôi tách DNA từ thực vật tương đối nhiều rồi. Trước hết bạn tách bóc bằng pp CTAB hay cần sử dụng Protease K? Nêu vắn tắt protocol và upload cái hình ảnh điện di lên được ko?
N
Nguyễn Đặng Thu CúcMember
gianghanviet said:
Các bạn ơi, mình đang làm cho đồ án giỏi nghiệp , chủ đề là khám phá tính đa dạng di truyền của cây điều, cơ chế dựa trên cách thức RADP (AFLP (and RFLP) of cashew) , nhưng mà mình chạm chán 1 vướng mắc gỡ mãi ko ra. Số là mình ko làm sao để trích lý DNA mang lại đạt chuẩn được. Theo kim chỉ nan thì tác dụng trích lý bởi lá non là hiệu quả tốt nhất, tuy vậy ở lá điều non thì bản thân lại ko trích lý được DNA mà không tìm ra được nguyên nhân. Mình tất cả thế trích lý được trên lá cứng cáp nhưng bị mear lắm, giống hệt như đuôi sao chổi. Thông thường , DNA đạt chât lượng lúc chụp máy và nhuộm tia UV cần ra 1 band thật sáng (và chỉ một band đó thôi). Nhưng của mình đều ra 1 vết lâu năm hoặc 1 band tất cả một vệt dài bên dưới, bạn ta call đó là gãy DNA. Mình ko biết ngoài tại sao đó còn có nguyên nhân nào không giống không. Bạn muốn tìm ra tại sao và bí quyết khắc phục. Không nhiều nhât làm ko ra thì phải tìm được nguyên nhân đại bại mới report được. Mình còn thời gian ít lắm...huhuhu...Ai giúp mình với. Còn một cụ thể nữa, lá điều mình đề xuất về Nha Trang lấy , trữ vài ba ngày rồi bắt đầu đưa vào chống thí nghiệm. Ko biết có phải đấy là nguyên nhân ko nữa.Bây giờ bản thân rất yêu cầu tài liệu về1. Thành phần hóa học của lá cây me, cây cacao.2. Cách thức trích lý DNA của cây điều (nhất là các bước (protocol)).Có chúng ta nào gồm thì giúp mình cùng với nhen....huhuhuhu.....
Xem thêm: Written Off Là Gì - Write Off / Xóa Sổ, Loại Bỏ
Thời gian vừa rồi em bao gồm làm bóc DNA tự lá cây thực đồ (Arabidopsis Thaliana), em cũng có DNA isolation protocol (với CTAB). Trường hợp chị phải em hoàn toàn có thể post lên đây để chị tham khảo. Em cũng gặp trường hợp tương tự như là DNA chiếm được không xuất sắc lắm. Em nghĩ nguyên nhân chính là do quá trình tách, cùng preserve lá cây sau khoản thời gian lấy mẫu. Smear chị nhìn thấy rất hoàn toàn có thể là RNA, hoàn toàn có thể loại bỏ bằng cách dùng RNase. Dẫu vậy em suy nghĩ hai phương thức AFLP cùng RFLP chỉ work on DNA, yêu cầu RNA không interfere nhiều đâu ạ. đề xuất RNase có lẽ không buộc phải thiết.
Protocol và mẫu hiệu quả của lá điềuPROTOCOL- B1: nghiền chủng loại lá tươi bằng cối vào 1.2ml EB buffer(EB: tris-HCl, NaCl, EDTA, CTAB, nước cất)-B2: mang lại vô eppendorf 1.5ml, vortex ky (khoang 5 - 10 phut)-B3:ủ làm việc 65 độ C trong 45 phút-B4: mang đến chloroform/isoamyl (24:1) vào, vortex (10 phut), ly trọng tâm 5 phút14.000vònng 10độ C-B5: hút dịch noi mang lại vô eppendorf mới, lập lại B4-B6: mang lại RNase ủ 37 độ C vào 60 phut-B7: đến isopropanol để -20 độ C trong 30 phút (nhưng thường đến qua đêm vày qui trình quá nhiều năm )-B8: ly trung khu 14.000 vòng vào 5 phut 10 độ C-B9: vì chưng dich tren, rước kết tủa.-B10: mang lại TE 1X u 37doC 30phut để tan kết tủa rồi thấm sodium acetatva ethanol 100% vao ly tâm14.000 vòng 5 phút 10 độ C-B11: rửa bởi ethanol 70% 2 lần bằng cách do dd vao ket tua roi lytam 14.000vong 2phut 10doC.-B12: để khô tự nhiên và thoải mái rồi cho TE 1X u 37doC trong 30 - 60phut.ton tru -20doC END.CÂU HỎI :-đã mang đến RNase đề nghị những vệt smear đó chưa phải là RNA với lại trường hợp làRNA thi smear vẫn nằm hết sức thấp, dưới cả vệt loading dye ở đầu cuối (đã thử ko đến RNase). Vậy liệu ngoài kỹ năng là DNA gãy thì smear đó rất có thể là gì khác không?-Ðã tiến hành các làm việc rất nhẹ nhàng, làm trên cây me cùng ca cao thuộc 1 các bước như vậy tuy nhiên band siêu to, ko gồm hay rất ít smear.-Liệu việc lưu trữ khá lâu chủng loại trong tủ lạnh trước lúc đưa vào tủ -20 độ C và thời hạn tồn trữ khá lâu trong quá trình trích lý (khoảng trên dưới 2 tuần những lần tồn) có tác động ko?-Ngòai cách nghiền mẫu mã lá tươi tất cả cách lý trích nào không giống , để sở hữu thời gian thu thập và lưu tồn mẫu được lâu dài hơn (vì làm về nhiều mẫu mã di truyền) tại chỗ này có có tác dụng thử bằng mẫu lá thô (làm khô bởi silicagel) tuy nhiên trích lý ra khôn xiết smear.-Vì sao lá điều non lý trích ko ra ?
bạn mang lại RNAse phần trăm bao nhiêu % vậy?rất có chức năng smear của người sử dụng là RNA cùng còn dính thêm 1 số protein khác cho nên nó chạy chậm chính vì như vậy vệt smear này nằm thấp.Trong protocol bạn làm có 2 điểm tui chú ý:-B4: đến chloroform/isoamyl (24:1) vào, vortex (10 phut), ly vai trung phong 5 phút 14.000vònng 10độ C -B5: hút dịch noi đến vô eppendorf mới, lập lại B4 -B6: mang đến RNase ủ 37 độ C vào 60 phut trước lúc sang cách 6, khi nào tui cũng lọc lấy tủa DNA bằng Et 80%, thanh lọc rữa kỹ lưỡng, nhằm khô tự nhiên vài tiếng, hoàn thành mới đến TE buffer vào hòa tan DNA kế đến mới mang lại RNAase vô. Vì quy trình bạn thu dịch nổi ở bước 5 có thể dính 1 chút đỉnh Chloroform gây tác động đến RNAase. Trong lúc ủ với RNAase ?phải lắc nhẹ mang đến RNAse hòa tan đều.Tôi sẽ chuyển câu hỏi của bạn cho 1 chuyên gia có tác dụng về thực đồ gia dụng giúp giải đáp.
HI. Bản thân xem quy trình của người sử dụng rùi. Bản thân có một số trong những góp ý sau.- giả dụ chât lượng ADN như trong ảnh bạn post lên thì QUÁ đầy đủ đề có tác dụng RAPD, mình cũng làm rât nhiều về RAPD, ADN như bạn bóc tách được là quá giỏi để các bạn làm RAPD, hãy yên trọng tâm về chât lượng ADN.- nếu như bạn còn muốn tối ưu hơn thì mình có một trong những góp ý sau: ?+ Trong quy trình của bạn, ở cách 4, không nên voltex mang đến 10 phút, mà nên làm lắc mạnh bằng tay 6-7 lân. Đây cũng là trong những nguyên nhân gây gãy ADN. + kiểm tra lại ARNse, chúng ta nên chắc hẳn rằng rằng ARNase đã được vứt bỏ ADNase bằng phương pháp đun ởn 100oC trong 10 phút (có thể dùng máy PCR). + Việc bóc tách ADN tự mâũ lá non thì theo tôi, các bạn phải nghiền dịu tay hơn vày thành tế bào sinh sống mâũ lá non không vững chắc như sinh sống lá già, bởi vì đó rất có thể bạn đã làm cho gãy cơ học tập ADN ở quá trình nghiền mâũ. Bạn cũng có thể nghiền mâũ lá non bởi ống Effendorf 1.5ml, "chày" thì chúng ta dùng đâù tip 1ml hơ nóng rùi ấn nhanh vào ống Eff 1.5ml luân chuyển để chế tạo ra đâù tròn của ống và vừa đẹp với CỐI. Nghiền bởi dụng nỗ lực này sẽ sở hữu được lực ép yếu hơn. + Còn một góp ý nữa. Sau bước 3. Chúng ta nên cho mâũ vào thùng đá và lắc vơi 50-100 vòng/phút trong 1,5h. Bước này sẽ giúp đỡ ADN được phân tách ra xuất sắc hơn.. ? Tui chỉ giup được vâỵ thôi, mong muốn là bạn sẽ thành công.Chú ý là: nếu không tồn tại thời gian nhiều thì ADN cơ mà bạn tách được vân là quá xuất sắc đề có tác dụng RAPD (nhớ buộc phải đo OD, đem đến nồng độ tối ưu 100ng ADN/1ul nhằm RAPD được chạy tốt).BYE
Tôi chấp nhận với skyvn về dòng hình ảnh. Unique DNA bạn bóc như cụ đã được rồi. Bạn chỉ việc đo OD thêm để xác minh tính sạch của thành phầm DNA.Tôi ko nghĩ phần đa vệt mờ đó là do RNAase đâu. Trơn rRNA đã nhiều loại hết rồi thì không có lý vày gì bảo RNAase ko hoạt động.Đối với những mẫu đã tách bóc rồi, bạn muốn đẹp hơn thì chỉ việc "tủa lại bằng EtOH", năng lượng điện di lượng mẫu đậm hơn, chỉnh ống kính, bấm thiết bị remove background.Đối với mẫu chưa tách, bao gồm 2 phương pháp tối ưu1. Nếu sẽ phải tủa qua tối thì chúng ta thử nỗ lực isopropanol bởi EtOH 100% chưa?2. Giảm thời gian ử mẫu ở 65oC xuống 30 min.Đối với chủng loại lá non, tôi cấm đoán rằng DNA bị vỡ khi bị ép cơ học. Ở bên này khi tôi cho thăm phòng thử nghiệm chuyên bóc DNA bởi CTAB. Họ ép mẫu bởi robot thực hiện lực từ để "lắc" viên bi sắt trong khi mẫu đựng vào đầu tip 1 ml. Do đó, khi thu mẫu mã họ thu trực tiếp vào vỏ hộp đầu tip, nhúng tức thì vào nitơ lỏng (đây là bắt buộc, và cũng hoàn toàn có thể là lý do bạn mất mẫu mã khi bóc mô lá non, tế bào non chứa đựng nhiều nuclease), bổ sung đệm vào đầu tip và gửi lên máy. Các bước này cực kỳ công nghiệp . Tôi sẽ nhờ 1 các bạn chuyên trách tiến trình này nhằm hỏi xem chúng ta có chuyển đổi gì vào buffer so với của chúng ta ko?
Mình cực kỳ cảm ơn sự đóng góp nhiệt tình của các bạn, nó góp minh lạc quan hơn rất nhiều, thiệt sự giờ bản thân rối quá!!! ?mình muốn hỏi ko biết tài năng liệu nào kia noi về mẫu smear này không? liệu nó có ảnh hưởng gì tới sự việc chạy RAPD không, bởi RAPD la dùng các cặp mồi tự dưng dể nhân những đọan fragment rồi đối chiếu số đoạn nay để xác định tính đa dạng mẫu mã di truyền. Nhưng nếu DNA bị gãy do đó thì sẽ tạo nên ra phần đông đoạn fragment ngắn, bị cắt ngang vì chưng bị gãy, vậy có tác động đến công dụng phân tích tính đa dạng mẫu mã không? lần chần có sách vở và giấy tờ nào đó nói đến vấn đề này không, bởi vì lên báo cáo mình cần phải có "sách , tất cả chứng" cho những thầy về năng lực vẫn hoàn toàn có thể dung RAPD của mẫu ly trích này là đảm bảo. Các bạn có thể giúp mình với, rất có thể giải đáp dùm mình không?
Theo quan lại điểm của bản thân mình về hình ảnh mà bạn post lên, mình có một số nhận xét như sau:1. Về hàm vị DNA, do vậy là đã đủ để triển khai phản ứng PCR-RAPD, do kỹ thuật này chỉ cần một luợng nhỏ ADN (khoảng vài mang lại vài trục ng là đủ). Dùng các quá cũng không tốt.2. Về chất lượng lượng, bởi vậy chưa thể nói là được tốt không. Vì chưng sao? nếu bạn dùng ngay mẫu mã này nhằm chạy RAPD thì tôi nói là trọn vẹn chưa đựợc. Bởi sao? vì chưng chất lựợng ADN ở các mẫu không như nhau, vệt smear quá đậm. Tuy nhiên bạn vẫn thu được kết quả PCR-RAPD sau khoản thời gian điện di, có thể là còn đẹp nữa. Dẫu vậy bạn đã trở nên mắc vào một trong 5-6 disadvantages của PCR-RAPD đó là cần phải có DNA toàn bô đồng hồ hết về chất lựơng giữa những mẫu, ADN phải tương đối nguyên vẹn thì khi đó ta mới đối chiếu đựợc trên hiệ tượng của phương pháp PCR-RAPD. Điều này quánh biệt lưu ý khi có tác dụng với RAPD. (ngoài tài liệu tôi xem thêm khi thao tác làm việc với RAPD, GS Lê è Bình cũng đã nói với shop chúng tôi về vấn đề này).Xem quy trình của bạn tôi bao gồm một vài ba góp ý:1. Các bạn đã áp dụng CTAB để bóc ADN, detergent này rất thích hợp cho việc loại trừ protein và đặc biệt là polysaccharide (polysacchride se làm cho dịch chiết ADN trở phải bị nhớt). Vì vậy, CTAB vô cùng được ưa cần sử dụng trong việc bóc ADN thực vật và các mẫu có chứa lượng chất polysaccharide cao.Nhưng bạn cần phải sử dụng đúng cách dán thì CTAB bắt đầu phát huy đựợc công dụng của nó. Trong quy trình bạn chuyển ra bạn không nói mật độ của Nacl, cùng nồng độ của CTAB là bao nhiêu. Điều này rất là quan trọng. Các bạn cho tôi biết các bạn đã cần sử dụng nó bao nhiêu khi ấy tôi sẽ lưu ý cho bạn.2. Chúng ta dùng Isopropanol để kết tủa ADN, nhưng các bạn lại tiến hành ở -20oC. Ở điều kiện này những protein và các chất khác cũng trở thành kết tủa thuộc ADN cần trong mẫu của doanh nghiệp se bị lẫn tạp. Fan ta thường thực hiện ở RT để tránh protein kết tủa thuộc (điều này được chú ý khi dùng Isopropanol). Tôi vẫn thử với quả quả thật vậy.3. Bởi mẫu của chúng ta là Thực vật, nhưng tôi ko thấy các bạn dùng chất nào để can thiệp vào những hợp hóa học polyphenol, dung nhan tố,... Hóa học này hoàn toàn có thể chiếm cho tới 30% vào thực vật. Bởi vì sản phẩm thay đổi của polyphenol sẽ liên kết vào ADN tạo ra thành phức và bước vào cùng cùng với ADN khi bạn kết tủa. Hơn nữa, nó gồm thể ảnh hưởng đến enzym polymerase do nó bắt mất ion Mg.Đấy là một trong vài nhắc nhở nho nhỏ dại của tôi, bạn khám phá xem cầm nào nhé.Chúc các bạn thành công.
Xem thêm: Ngứa Tai Báo Điềm Gì ? Tìm Hiểu Điềm Báo Ngứa Tai Để Tránh Ngứa Tai Trái Là Điềm Gì
Gửi bạn thành viên cũ!Bạn ơi cho chính mình hỏi
You must log in or register lớn reply here.
Share:
FacebookTwitterEmailShareLink
 | bóc chiết DNA đậu tương | Di truyền và Sinh học phân tử | 1 | Sep 18, 2022 |
| C | Xin trợ giúp về tách chiết, tinh không bẩn DNA bởi hạt vi từ | Làm thể nghiệm với acid nucleic | 0 | Mar 7, 2018 |
| A | tách chiết DNA tự agarose gel không dùng Kits | Làm thí nghiệm với acid nucleic | 0 | Jan 15, 2017 |
| D | Xin protocol tách bóc DNA tổng số từ nấm mèo đảm | Làm thí điểm với acid nucleic | 1 | Nov 30, 2015 |
| H | bóc chiết DNA trường đoản cú máu | Làm thử nghiệm với acid nucleic | 0 | Nov 19, 2014 |
